人HLA-DR抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書  

本試劑盒僅供研究使用。  

檢測范圍：   96T  

6  pg/ml -300 pg/ml

使用目的：  

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中HLA-DR  抗體含量。  

實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人  HLA-DR  抗體水平。用純化的抗原包被微孔  板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入  HLA-DR  抗體，再與  HRP  標(biāo)記的抗原結(jié)  合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物  TMB  顯色。TMB  在  HRP  酶  的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的  HLA-DR  抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在  450nm  波長下測定吸光度（OD  值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中  人  HLA-DR  抗體濃度。  

試劑盒組成  

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液  6ml×1 瓶
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml)  0.5ml×1 瓶
9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份
11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1  個(gè)
標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能  馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融  

2．不能檢測含  NaN3 的樣品，因 NaN3  抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。  

操作步驟  

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀  釋。   

40pg/ml   5  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品   150μl  的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   120pg/ml  

4  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品   150μl  的 

5  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   60pg/ml   3  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品   150μl  的  4  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   30pg/ml   2  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品   150μl  的  3  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   15pg/ml   1  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品   150μl  的  2  號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、  待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣  50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液  40μl，然后再加待測樣品  10μl（樣品最終稀釋度為  5  倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡  量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3.  溫育：用封板膜封板后置  37℃溫育  30  分鐘。  

4.  配液：將  30  倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30  倍稀釋后備用   5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置  30  秒后棄去，如此  重復(fù)  5  次，拍干。   6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑  50μl，空白孔除外。   7.  溫育：操作同  3。   8.  洗滌：操作同  5。   9.  顯色：每孔先加入顯色劑  A50μl，再加入顯色劑  B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色   10  分鐘. 10.  終止：每孔加終止液  50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。   11.  測定：以空白孔調(diào)零，450nm  波長依序測量各孔的吸光度（OD  值）。  測定應(yīng)在加終止 液后  15  分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 

操作程序總結(jié)：

人HLA-DR抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書  

計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD  值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的  OD  值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD  值計(jì)算出標(biāo)  準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的  OD  值入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。  

注意事項(xiàng)  

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡  15-30  分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。  

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。  

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好  控制在  5  分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。  

4．  請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD  值  大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的  OD  值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n  倍）后再測定，計(jì)  算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。  

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。  

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).   8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。  

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。  

保存條件及有效期  

1．試劑盒保存：；2-8℃。  

2．有效期：6  個(gè)月