操作ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟及常見(jiàn)問(wèn)題匯總

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟的詳細(xì)說(shuō)明：

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請(qǐng)避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作的常見(jiàn)問(wèn)題。

　　一、一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間?

　　雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。

　　二、血清樣本如何處理?

　　全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　三、血漿樣本如何處理?

　　建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　四、細(xì)胞上清液樣本如何處理?

　　檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細(xì)收集上清。

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