標簽： 免疫 血清 制備 實驗

　　本生帶您了解實驗室免疫血清的制備實驗!

　　免疫血清的制備是一項常用的免疫學實驗技術。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學診斷的試劑 (如用于制備免疫標記抗體等)，也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體，常可獲得價的免疫血清。本生生物整理如下：

　　實驗材料：家兔

　　試劑、試劑盒：滅菌生理鹽水 IgG 酒精 dian酒 羊毛脂 石蠟油 BCG FIA FCA-IgG

　　儀器、耗材：剪刀 鑷子 注射器 針頭 稱量瓶 量筒 動物固定架 三角燒瓶 手術器械 血管夾 黑絲線 放血管

　　實驗步驟：

　　1. 心臟采用血法

　　(1) 家兔仰面，四肢縛于動物固定架上 (或由助手抓住四肢固定)。

　　(2) 剪去左胸部兔毛，消毒皮膚。

　　(3) 用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動的部位。

　　(4) 用 50 ml 注射器 (連接 16 號針頭)，傾針 45°角度，對準心搏處刺入心臟抽血致死。

　　(5) 將抽取的血液立即注入無菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清。

　　2. 頸動脈放血法

　　(1) 家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚。

　　(2) 沿頸部中線切開皮膚約 10 cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側的胸鎖乳突肌。

　　(3) 分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動脈后使之游離。

　　(4) 于動脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠心及近心端。結扎遠心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾住。

　　(5) 用尖頭小剪刀在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口，插入塑料放血管。再將近心端的絲線結扎固定于放血管上，以防放血管滑脫。

　　(6) 松開血管夾，使血液流入滅菌三角燒瓶中。一般一只家兔可放血 80～100 ml。

　　三、分離血清

　　將三角燒瓶的血置 37 ℃ 溫箱 1 小時，再置 4 ℃ 冰箱內 3～4 小時。待血液凝固收縮后，用毛細滴管吸取血清。于 3000 rpm 離心 15 分鐘，取上清加入防腐劑 (0.01 % 硫柳汞或 0.02 % 疊氮鈉，最終濃度)，分裝后置 4 ℃ 冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

　　注意事項：

　　1. 免疫用實驗動物的抗體反應性個體差異性較大，因此免疫時至少應選用兩只以上動物。另外，不能使用妊娠動物。

　　2. 免疫用的抗原必須經 FCA 或 FIA 充分乳化后才能注射，否則將明顯影響抗原的免疫效果。上述制備乳化抗原的方法較費時、費力。采用 H-81 微型振蕩混合器法或三腔管研磨法制備。前者是將抗原液與佐劑按比例混合后，置于混合器上使之劇烈振蕩 (頻率 2900 轉/分，振幅 6 mm); 后者是將免疫用的佐劑和抗原液按比例混合后，吸入注射器內再將注射器連接于三腔管上反復抽吸研磨。這兩種方法約 1 小時即可使抗原充分乳化。

　　3. 佐劑一方面可提高特異性免疫反應的效果獲得高效價的免疫血清，但若抗原不純時，可使抗原中極微量的污染物 (0.005 mgN) 產生抗體，以致導致免疫血清的純度受到影響。另外，有些實驗動物種系對 BCG 過敏，尤其是豚鼠其次是家兔，當再次注射*佐劑時，可以引起變tai反應而導致免疫失敗。為此，第二次免疫注射時應減少佐劑中 BCG 的含量或改用不*佐劑，以減少和防止變tai反應的發(fā)生。

　　4. 抗原的劑量決定于抗原的種類。對免疫原性強的抗原劑量應相別較少，免疫原性弱的抗原劑量可相對較多。抗原的用量一般以體重計算。在使用佐劑的情況下，一次注入的總劑量以 0.5 mg/kg 體重為宜。如不加佐劑時劑量可加大 10 倍。另外，免疫周期長者可少量多次注射，免疫周期短者可較大量少次注射。

　　5. 免疫方法上也可采用多點注射法免疫動物。即于家兔脊柱兩旁選 4-6 點皮下注射，同時于兩側肩部 (或臂部) 和鼠蹊部各注一處。每點注 0.2 ml，間隔 2 周后再于上述部位選不同點同上注射，也可產生高效價的免疫血清。

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