猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒操作步驟及樣本處理

　　猴白介素4(IL-4)操作步驟：

　　1.加入50ul標準品(Standards)、血清標本于相應反應板孔中。

　　2.每孔加入100ul酶聯(lián)物(Conjugate)，輕輕混勻30秒(重要)，室溫60分鐘。

　　3.洗板：甩盡板內(nèi)液體，用蒸餾水或者洗滌液(普通洗滌液，自配)洗滌反應板，并去除 水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次。

　　4.每孔加入100ul顯色液，輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。

　　5.每孔加入50ul終止液(StopSolution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。elisa試劑盒

　　樣本處理及要求：

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

　　2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

　　3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4.,細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

　　7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒注意事項：

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

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